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多重免疫组化染色
产品简介:

多重免疫组化染色原理 :利用抗原与抗体特异性结合的原理,使一抗与组织或细胞中的靶抗原结合;加入HRP标记的二抗,它能与一抗特异性结合,形成“抗原-一抗-HRP标记二抗"的复合物,加入酪胺荧光染料,在HRP和过氧化氢的存在下,酪胺被活化并与抗原附近的蛋白残基共价结合,大量的荧光素沉积在抗原-抗体结合部分,使信号得到放大,通过多次重复上述步骤,每次使用不同的一抗和对应的酪胺荧光染料,即可实现对多个靶标

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更新时间:2025-03-06

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产品介绍

多重免疫组化染色实验步骤

样本准备:包括石蜡切片、冰冻切片或细胞爬片等的处理,如固定、抗原修复、阻断内源性过氧化物酶等。

一抗孵育:滴加用抗体稀释液稀释好的一抗,在避光湿盒内孵育一定时间。

二抗孵育:洗涤后加入与一抗相应种属的HRP标记二抗,避光室温孵育。

TSA荧光染料染色:滴加酪胺荧光染料,室温反应一段时间后洗涤。

抗体洗脱:采用热修复或抗体洗脱液等方法洗脱前一轮的抗体,以便进行下一轮标记。

重复标记:重复上述步骤,使用不同的一抗和荧光染料,实现多重标记。

复染细胞核及封片:用DAPI等核染料复染细胞核,滴加抗荧光淬灭封片剂封片。

镜检拍照:在荧光显微镜等设备下观察并采集图像。

多重免疫组化染色注意事项

抗体选择与优化:要选择特异性高、经过验证的抗体,并优化抗体的浓度和孵育时间等条件。 

表位掩蔽问题:注意抗体的染色顺序,避免表位掩蔽现象,可通过调整抗体顺序或采用其他方法来解决。

实验对照设置:设置阳性对照和阴性对照,以确保实验结果的准确性和可靠性。

信号放大倍数的控制:根据具体实验需求和荧光信号强度,合理选择是否添加TSA增强剂等手段来控制信号放大倍数。





 

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