原位杂交检测的基本原理是利用核酸分子单链之间互补的碱基序列，将有放射性或非放射性的外源核酸（即探针）与组织、细胞或染色体上待测DNA或RNA互补配对，结合成专一的核酸杂交分子，经一定的检测手段将待测核酸在组织、细胞或染色体上的位置显示出来。

FISH实验方法及步骤

一.探针变性

将探针在75oC恒温水浴中温育5min，立即置0oC，5～10min，使双链DNA探针变性。

二.标本变性

①将制备好的5-8um的玻片标本于50oC培养箱中烤片2～3h。（经Giemsa染色的标本需预先在固定液中退色后再烤片）。

②取出玻片标本，将其浸在70～75oC的体积分数70％甲酰胺/2×SSC的变性液中变性2～3min。

③立即按顺序将标本经体积分数70％、体积分数90％和体积分数100％冰乙醇系列脱水，每次5min，然后空气干燥。

三.杂交

将已变性或预退火的DNA探针10μL 滴于已变性并脱水的玻片标本上，盖上18×18盖玻片，用Parafilm封片，置于潮湿暗盒中37oC杂交过夜（约15～17h）。由于杂交液较少，而且杂交温度较高，持续时间又长，因此为了保持标本的湿润状态，此过程在湿盒中进行。

四.洗脱

此步骤有助于除去非特异性结合的探针，从而降低本底。

（1） 杂交次日，将标本从37oC温箱中取出，用刀片轻轻将盖玻片揭掉。

（2） 将已杂交的玻片标本放置于已预热42～50oC的体积分数50％甲酰胺/2×SSC中洗涤3次，每次5min。

（3） 在已预热42～50oC的1×SSC中洗涤3次，每次5min。

（4） 在室温下，将玻片标本于2×SSC中轻洗一下。

（5） 取出玻片，自然干燥。

（6） 取200μL复染溶液（PI/antifade或DAPI/antifade染液）滴加在玻片标本上，盖上盖玻片。

五.荧光显微镜观察FISH结果